1、华佗何晟铭饰演、明心李依晓饰演、吴成朱晓渔饰演、胡半仙刘冠麟饰演、喜莲刘芷汐饰演、周瑜李宗翰饰演。

2、华佗一代神医。他乐于治病行医，医术高超，坚持孜孜不倦地进取，研制麻沸散、自创五禽戏、开创外科手术先河，只为更多地减轻患者病痛、强健百姓体魄；他医德高尚，游医天下，免费为穷苦百姓行医治病，深得百姓的尊重与爱戴；身为举世闻名的神医，他视功名于粪土，不把为权贵看病置于为百姓看病之上，甚至因此得罪当权者。

3、明心谯郡县县令之女。与华佗一见钟情，但是由于父亲的阻扰和吴成的故意破坏，两人分手，明心也被吴成下药眼睛失明。县令被人陷害后处死，家道中落的明心陷入悲惨的境地。早已相识的华佗为明心医治眼睛进而让两人再次互生情愫，之后明心一直陪伴在华佗身边。

4、吴成华佗的二师兄。自小与华佗一起学习医术，但是心机深沉为人阴狠，为了达目地他算计师弟、强夺师弟所爱，然后又为逐名利抛弃妻子、好权谋术、欺师灭祖，可谓无所不用其极。与华佗一直针锋相对，想尽办法打击陷害华佗。

5、胡半仙华佗的大师兄，谯郡县的医官。虽然医术高超，但是爱占小便宜有时还会坑蒙拐骗。他习惯游走于市井，悠哉处事、乐观混世的生活态度并不被身边亲朋看好。然而他对率真俏皮的喜莲一往情深，可以毫无保留地倾尽所有。

6、喜莲俏皮泼辣的萌妹子，“野蛮女友”式人物。一直陪伴在明心身边。她率真的性格吸引了胡半仙的注意，此后对其爱得一发不可收拾。最后因卷入曹家内斗，喜莲与胡半仙在刑场结婚，双双下酒后殉情而亡。

7、周瑜东汉末年名将，水军大都督，孙权手下得力将领，一心对抗曹操。周瑜患有失眠病，他广招天下名医都没有医治好，而华佗却手到病除让他免除多日来失眠的痛苦。周瑜知道华佗想去曹营救治瘟疫，于是想华佗软禁起来，却被华佗巧妙逃脱。