黄鼠狼的食性很杂，在野外以老鼠和野兔为主食，也吃鸟卵及幼雏、鱼、蛙和昆虫；在农民的家附近，常在夜间偷袭家禽，首先吸食其血液，再吃内脏及躯体，最爱吸血。也大量捕食鼠类，是害鼠的天敌。

黄鼠狼一般栖息于山地和平原，见于林缘、河谷、灌丛和草丘中、也常出没在村庄附近。居于石洞、树洞或倒木下。常见于原生和次生的落叶林、针叶林和混交林，以及开阔地带的小片森林和森林草原。

黄鼠狼属于夜行性的，尤其是清晨和黄昏活动频繁，有时也在白天活动。相机捕获和直接观察表明该物种主要是昼夜活动，尽管它已被相机捕获并发现夜间更加活跃。通常单独行动。