欧尼桑和欧尼酱的区别在于称呼时的语气、称呼时的对象、偏重的人群等方面。

称呼时的语气：因为欧尼桑是年纪比较小的人对兄长的一种尊称，称呼兄长时是一种尊敬的语气；欧尼酱是对兄长的一种亲切的叫法，欧尼酱的语气比较亲昵。

称呼时的对象：欧尼桑可以称呼自己的哥哥，也可以称呼别人的哥哥，所以欧尼桑偏于成人的口语；欧尼酱一般只是称呼自己的亲哥哥，或者和自己关系比较好的哥哥，欧尼酱的口语偏孩子。

偏重的人群：欧尼桑语气比较尊敬，是一种敬重的叫法，所以欧尼桑的使用偏向于成人；欧尼酱的语气比较亲切调皮，所以欧尼酱的使用偏向于孩子。